手術室潔凈等級的確定通常依據以下幾種方法和標準：

一、按空氣中灰塵粒子數劃分

根據每立方米中粒徑大于或等于0.5微米的空氣灰塵粒子數的多少，潔凈手術室可分為以下四級：

百級：手術室內空氣中的灰塵粒子數極少，具體數量標準因不同標準而異，但通常極低。也有說法認為，百級手術室是指潔凈度100級，大于等于0.5微米的塵粒數在350粒/立方米（0.35粒/升）到3500粒/立方米（3.5粒/升）之間，大于等于5微米的塵粒數為0。

千級：手術室內空氣中的灰塵粒子數略多于百級，但仍保持在較低水平。也有說法認為，千級手術室是指潔凈度1000級，大于等于0.5微米的塵粒數在3500粒/立方米（3.5粒/升）到35000粒/立方米（35粒/升）之間，大于等于5微米的塵粒數小于等于300粒/立方米（0.3粒/升）。

萬級：手術室內空氣中的灰塵粒子數相對較多，但仍能滿足一般無菌手術的要求。也有說法認為，萬級手術室是指潔凈度10000級，大于等于0.5微米的塵粒數在35000粒/立方米（35粒/升）到350000粒/立方米（350粒/升）之間，大于等于5微米的塵粒數在300粒/立方米（0.3粒/升）到3000粒/立方米（3粒/升）之間。

十萬級：手術室內空氣中的灰塵粒子數多，但仍需控制在一定范圍內，以確保手術室的相對潔凈。

另外，有的標準還會增設300000級，即空氣中的塵埃顆粒數低于每立方英尺300000個，適用于實驗操作、材料處理等低風險、低精度的工作。

二、按空氣中浮游菌和沉降菌數量劃分

根據國家標準，潔凈手術室也可按空氣中浮游菌和沉降菌的數量分為四級：

Ⅰ級潔凈手術室：空氣中的浮游菌和沉降菌數量要求低，每立方米空氣中的浮游菌數量不得超過10個，沉降菌數量不得超過5個。適用于心臟外科、器官移植等高風險手術。

Ⅱ級潔凈手術室：空氣中的浮游菌和沉降菌數量要求稍高，每立方米空氣中的浮游菌數量不得超過100個，沉降菌數量不得超過50個。適用于普通外科、婦產科、眼科等手術。

Ⅲ級潔凈手術室：空氣中的浮游菌和沉降菌數量要求適中，每立方米空氣中的浮游菌數量不得超過1000個，沉降菌數量不得超過500個。適用于骨科、耳鼻喉科、皮膚科等手術。

Ⅳ級潔凈手術室：空氣中的浮游菌和沉降菌數量要求高（但相對于其他級別而言高，實際數量仍嚴格控制），每立方米空氣中的浮游菌數量不得超過10000個，沉降菌數量不得超過5000個。適用于牙科、整形外科等手術。

三、按手術室用途和科室劃分

根據手術室的用途和所在科室的不同，也可將手術室劃分為不同的潔凈度級別：

特別潔凈手術室：手術區潔凈度為百級，周邊區為千級。適用于燒傷、關節轉換、器官移植、腦外科、眼科、整形外科及心臟外科等無菌手術。

潔凈手術室：手術區潔凈度為千級，周邊區為萬級。適用于胸外科、整形外科、泌尿外科、肝膽胰外科、骨外科及取卵等無菌手術。

一般潔凈手術室：手術區潔凈度為萬級，周邊區為十萬級。適用于普通外科、皮膚科及腹外科等手術。

準潔凈手術室：空氣潔凈度為十萬級。適用于產科、肛腸外科等手術。